多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）是通过用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，刺激机体多个B细胞克隆，从而产生针对多种抗原表位的不同抗体。最终获得的免疫血清实际上是包含多种抗体的混合物，即多克隆抗体。而单克隆抗体则是由单一B细胞克隆产生的高度均一、专门针对某一特定抗原表位的抗体。单克隆抗体通常采用杂交瘤技术进行制备，该技术基于细胞融合，将能够分泌特异性抗体的致敏B细胞与具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤。

一、单抗与多抗的优缺点

多克隆抗体的优点

1. 可放大低表达水平靶蛋白的信号；
2. 能识别多个表位；
3. 对抗原中的微小变化具有更好的适应性；
4. 能识别与免疫原蛋白质高同源性的蛋白，或从非免疫原物种中筛选靶蛋白；
5. 通常是检测变性蛋白质的首选；
6. 多表位通常提供更强的检测能力。

多克隆抗体的缺点

1. 易出现批次间差异；
2. 可能产生大量非特异性抗体，有时会导致背景信号；
3. 不适用于探测抗原的特定结构域，因为抗血清通常能识别多个结构域。

单克隆抗体的优点

1. 杂交瘤经过制备后成为恒定再生源，所有批次均相同；
2. 切片和细胞染色产生的背景相对较低；
3. 特异性高，适合用于一抗分析测定或检测组织中的抗原，通常背景染色显著低；
4. 同质性极高；
5. 单克隆抗体的特异性使其在混合物中能够高效结合抗原。

单克隆抗体的缺点

1. 尽管可产生大量特异性抗体，但可能会导致过强的特异性；
2. 抗原化学处理后，表位更容易丢失，因此可以通过使用同一抗原的多个单克隆抗体进行弥补。

二、单抗与多抗的选择

在需要高特异性、大用量或长期一致使用的抗体时，建议选择制备单克隆抗体。而多克隆抗体的特异性较差，即使使用相同抗原进行制备，不同批次之间的差异也会影响结果。在使用多抗进行免疫检测时，容易造成背景信号（如在WB中出现杂带或IHC中背景较深）。尽管存在交叉反应问题，但由于多抗能够识别多个抗原表位，实验结果往往不受个别表位变动的影响。若免疫原的量难以获取，建议制备单抗。若特异性要求不高，用于沉淀、凝集反应或ELISA检测的实验，则可选择制备多克隆抗体。相比于单抗，多克隆抗体制作时间短、首次制备成本较低，在某些情况下仍是可接受的选择，并且在相同条件下可提高检测灵敏度，更易检测丰度较低的蛋白。

三、抗原选择

抗原可以选择天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白及多肽，抗原质量越高，最终获得高质量抗体的可能性也随之增加。目前，抗体制备一般采用重组蛋白或多肽作为抗原。常规情况下，重组蛋白通常含有更多的抗原决定簇，包括空间表位和线性序列表位，可以充分刺激机体免疫反应，从而增加获取广泛应用抗体的可能性。如果目标蛋白已显示出修饰或复杂结构，重组蛋白通常被优先选择。此外，某些情况下必须使用多肽制备抗体，如针对同源家族特定蛋白的抗体生产，需要找到特异性氨基酸合成多肽，或者针对某些修饰型抗体，需要在多肽合成阶段进行特定氨基酸的修饰。抗原多肽选择一般遵循以下基本原则：

• 尽量选择位于蛋白表面的区域；
• 确保该序列不形成α-螺旋；
• N端和C端的肽段优于中间的肽段；
• 避免蛋白内部重复或接近重复段的序列；
• 避免同源性过高的肽段；
• 交联可在N端和C端进行，选择对抗体产生不太重要的一端进行交联；
• 序列中尽量少含有Pro，但一两个Pro会有助于稳定肽链结构，对产生特异性抗体有益。

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